• Développement préclinique
  • LAL
  • Thérapie ciblée
  • Chimiothérapie
  • Recherche préclinique (TRL 4-5)

Utilisation de modèles murins transgéniques pour le développement d’approches pharmacologiques par criblage de composés chimiques sur les cellules initiatrices et/ou propagatrices de la LAL-B. 

L’originalité de l'approche repose sur :

    • L’utilisation d’un modèle de criblage chimique sur des cellules primaires murines enrichies en cellules souches pré-leucémiques de la LAL-B
    • L’évaluation de composés chimiques sur des cellules portant uniquement un oncogène primaire (cellules initiatrices) 
    • La lecture multiparamétrique par FACS prenant en considération l’hétérogénéité phénotypique du système B normale et pré-leucémique
    • L’évaluation simultanée de l’impact de chaque molécule sur les cellules pré-leucémiques et sur l’ensemble des sous-populations du compartiment B normal (du stade pré-pro-B au stade mature B)
    • La prise en considération de la dépendance des cellules B normales et pré-leucémiques pour leur microenvironnement (co-culture miniaturisée sur cellules stromales)
    • Criblage chimique possible également sur cellules leucémiques transformées (cellules propagatrices porteuses de l’oncogène primaire et des altérations génétiques secondaires)

Description

Périmètre des activités de recherche

Recherche préclinique utilisant un modèle de souris transgénique pour le criblage de candidats médicaments sur les cellules souches pré-leucémiques des LAL-B. 

  • Modèle murin exprimant l’oncogène primaire PAX5-ELN et récapitulant le développement multi-étapes de la LAL-B par acquisition d’évènements secondaires (Jamrog et al., 2018)
  • Cellules pré-leucémiques (oncogène PAX5-ELN) initiatrices mimant les mécanismes moléculaires de la rechute de la maladie chez les patients (Fregona et al., 2024)
  • Cellules leucémiques transformées propagatrices porteuses de mutations secondaires
  • Criblage de candidats médicaments

Conduite des études

Les étapes :

  • Analyse/définition de la stratégie de l'étude
  • Identification des librairies de composés pertinentes à cribler en fonction de la question posée, incluant librairies commercialisées, librairies à façon et librairie académique (Chimiothèque Nationale)
  • Criblage des composés candidats sur cellules pré-leucémiques (initiatrices) ou leucémiques (propagatrices) murines 
  • Sélection des molécules candidates capables d’inhiber la viabilité des cellules (pré-)leucémiques et/ou restaurant leur différenciation 
  • Contre criblage en dose-réponse afin de déterminer les IC50 des molécules candidates
  • Collaboration avec chimistes pour la génération d’analogues pharmacologiques
  • Synthèse et évaluation de l’activité biologique des analogues
  • Développement et investigation poussé (in vitro et in vivo) de l’analogue sélectionné
  • Test de la molécule sur d’autres modèles murins de LAL-B (PAX5-P80R, TCF3-PBX1) et sur PDXs (en savoir plus)  
  • Analyse et communication des résultats

Infrastructure de recherche

Plateformes expérimentales et d'analyse :

Modèles :

  • Modèles murins de LAL-B

Personnels techniques :

  • Ingénieur d’étude pour la réalisation et l’analyse du criblage

Spécifications

La plateforme

Ensemble de modèles précliniques in vitro et in vivo spécifiques des LAL-B pour l'identification de candidats médicaments.

Les études

Criblage primaire de candidats médicaments :

  • J0 : Ensemencement de cellules stromales MS5 en plaque 96 puits
  • J1 : Enrichissement et ensemencement de cellules (pré-)leucémiques issus des souris transgéniques sur les cellules stromales
  • J1 : Traitement (dose à déterminer) des cellules (pré-)leucémiques (1 composé par puits) 
  • J3 : Analyse multiparamétriques par FACS (12 anticorps) couvrant l’ensemble des étapes de la différenciation B (du stade pré-pro-B au stade mature-B) et discriminant les cellules (pré-)leucémiques (Fregona et al., 2024)
  • Read out : Calcul du pourcentage et du nombre absolu de chaque sous-populations B normales et (pré-)leucémiques 
  • Impact de chaque composé sur les cellules des sous-populations B normales et (pré-)leucémiques

Contre-cribles de candidats médicaments :

  • Contre-crible des hits sélectionnés en dose-réponse (plaque 96 puits, triplicata/dose)
  • Calcul des IC50 de chaque hit sélectionné
  • Read out : Idem que criblage primaire pour chaque dose

Validation fonctionnelle du médicament candidat :

  • Traitement in vitro et transplantation pour déterminer si le médicament affect la fonction d’auto-renouvèlement des cellules initiatrices de la LAL-B
  • Traitement in vivo des souris transgéniques
  • Traitement in vivo de PDXs de LAL-B (en savoir plus)

 

Modalités

Entité OPALE

CRCT (UMR-1037)

CRCT (UMR-1037)
Bastien Gerby
Dr Bastien Gerby
Équipe IGAALD

Contact

Sandrine Palcy Dr Sandrine Palcy
Responsable du Business Development

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